下面給大家介紹一下用生化培養(yǎng)箱進(jìn)行腐乳產(chǎn)蛋白酶菌株的分離。

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康呐c要求

了解涂布分離和平板劃線(xiàn)法從食物中分離食源性微生物的原理和方法，并熟練掌握該操作方法。

二、實(shí)驗(yàn)原理

微生物是蛋白酶的來(lái)源，與動(dòng)物和植物相比，微生物作為蛋白酶的來(lái)源具有更多生理生化上的*性。微生物來(lái)源的蛋白酶都是胞外酶，易于分離純化，更重要的是微生物易于培養(yǎng)和發(fā)酵，有廣泛的生物化學(xué)多樣性和遺傳操作的感受性。

通過(guò)稀釋涂布法或劃線(xiàn)分離法在選擇性平板上可以對(duì)產(chǎn)蛋白酶菌株進(jìn)行分離。稀釋涂布平板法是一種將菌體按比例制備成若干個(gè)稀釋度，再分別經(jīng)涂棒涂布培養(yǎng)而進(jìn)行微生物分離純化的方法；平板劃線(xiàn)分離法是指把混雜在一起的微生物或同一微生物群體中的不同細(xì)胞用接種環(huán)在平板培養(yǎng)基表面通過(guò)分區(qū)劃線(xiàn)稀釋而得到較多獨(dú)立分布的單個(gè)細(xì)胞，經(jīng)培養(yǎng)后生長(zhǎng)繁殖成單菌落，通常把這種單菌落當(dāng)作待分離微生物的“純種”。有時(shí)這種單菌落并非都由單個(gè)細(xì)胞繁殖而來(lái)的，故必須反復(fù)分離多次才可得到純種。其原理是將微生物樣品在固體培養(yǎng)基表面多次作“由點(diǎn)到線(xiàn)”稀釋而達(dá)到分離目的的。

根據(jù)透明圈的大小來(lái)篩選目的菌株，透明圈越大的菌具有較強(qiáng)的產(chǎn)酶能力。對(duì)分離到的菌株進(jìn)行純化，得到高產(chǎn)蛋白酶菌株。

三、試驗(yàn)材料

1、材料與試劑

豆腐乳：市購(gòu)豆腐乳

2、主要儀器與設(shè)備

無(wú)菌操作箱、恒溫水浴鍋、生化培養(yǎng)箱、高壓滅菌鍋、振蕩培養(yǎng)箱

四、實(shí)驗(yàn)步驟與方法

1、培養(yǎng)基的制備

可溶性淀粉1%、酵母膏0.5%、酪蛋白1%、KH2PO40.1%、MgSO40.02%、瓊脂2.0%,pH值為中性.

配制方法:稱(chēng)取酪蛋白1.0g,先用少量2%NaOH潤(rùn)濕,玻棒攪動(dòng),再加適量的蒸餾水,在沸水浴中加熱并攪拌,至*溶解,補(bǔ)足水量至100mL,加入其他成分,調(diào)整pH,滅菌備用。

2、菌株純化分離(涂布法和劃線(xiàn)法每組選一種方法進(jìn)行操作)

（1）稀釋法分離:采用無(wú)菌水,10倍梯度稀釋豆腐乳的菌懸液到10^8，吸取10^6到10^8梯度的菌懸液各1mL，注入初篩培養(yǎng)基平板中,每個(gè)梯度做2個(gè)平行平板,涂布均勻。將涂布后的平板置于28℃的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h。

(2)劃線(xiàn)分離:對(duì)豆腐乳菌懸液(取1mL豆腐乳汁加入10mL無(wú)菌水制成)劃線(xiàn)分離,制作兩個(gè)劃線(xiàn)分離平板,將平板置于28℃的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h。